實驗原實驗原理：

理： 試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被人白細胞介素

17D（IL-17D）捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP 標記的檢測抗體，經

過溫育并洗滌。用底物 TMB 顯色，TMB 在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作

用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人白細胞介素 17D（IL-17D）呈正相關。用

酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。

樣本處理及要求：

1.

血清：將收集于血清分離管的全血標本在室溫放置 2 小時或 4℃過夜，然后 1000×g 離

心 20 分鐘，取上清即可，或將上清置于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。

2.

血漿：用 EDTA 或肝素作為抗凝劑采集標本，并將標本在采集后的 30 分鐘內于 2-8℃

1000×g 離心 15 分鐘，取上清即可檢測，或將上清置于-20℃或-80℃保存，但應避免

反復凍融。

3.

組織勻漿：用預冷的 PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織，去除殘留血液（勻漿中裂解的紅

細胞會影響測量結果），稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應體積的 PBS（一般按

1:9 的重量體積比，比如 1g 的組織樣品對應 9mL 的 PBS，具體體積可根據實驗需要適當

調整，并做好記錄。推薦在 PBS 中加入蛋白酶抑制劑）加入玻璃勻漿器中，于冰上充分

研磨。為了進一步裂解組織細胞，可以對勻漿液進行超聲破碎，或反復凍融。最后將勻

漿液于 5000×g 離心 5~10 分鐘，取上清檢測。

4.

細胞培養物上清：請1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測，或將上清置于-20℃或-80℃

保存，但應避免反復凍融。

5.

其它生物標本：1000×g 離心 20 分鐘，取上清即可檢測。

6.

樣品外觀：樣品應清澈透明，懸浮物應離心去除。

7.

樣品保存：樣品收集后若在 1 周內進行檢測的可保存于 4℃，若不能及時檢測，請按一

次使用量分裝，凍存于-20℃（1 個月內檢測），或-80℃（6 個月內檢測），避免反復凍

融，標本溶血會影響最后檢測結果，因此溶血標本不宜進行此項檢測。

注意事項：

1.

嚴格按照規定的時間和溫度進行溫育以保證準確結果。所有試劑都必須在使用前達到室

溫 20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑。

2.

洗板不正確可以導致不準確的結果。在加入底物前確保盡量吸干孔內液體。溫育過程中

不要讓微孔干燥掉。

3.

消除板底殘留的液體和手指印，否則影響 OD 值。

4.

底物顯色液應呈無色或很淺的顏色，已經變藍的底物液不能使用。

5.

避免試劑和標本的交叉污染以免造成錯誤結果。

6.

在儲存和溫育時避免強光直接照射。

7.

平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。

8.

任何反應試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發的強烈氣體。任何漂白成分都會破壞

試劑盒中反應試劑的生物活性。

9.

不能使用過期產品。

10. 如果可能傳播疾病，所有的樣品都應管理好，按照規定的程序處理樣品和檢測裝置。